陀枪师姐朱素娥与陈小生在上一辑的结合，原来只是生的幻想，娥对婚姻缺乏信心，决定用一年时间观察生的表现。工作上，娥被升为沙展，并调往E冲锋队，以其“师奶仔”性格去领导一群男子汉，遇到了前所未有的挫折，故寄望生可加快升职，稳定经济，让其可托付终身。生被娥“箝制”至透不过气之时，结识了一靓女邻居沈翘，翘浪漫独立，与生非常合拍，更主动向生示爱，生与娥之感情遂亮起红灯……另一方面，女警陈三元与程锋虽顺利结...

陈三元晋升为见习督察，被调到了交通部。初为上司的她严于律己之外，对下属也有十分高的要求，因此三元很容易与下属发生摩擦，与刚进入交通部的卫英姿也合不来。自小受父亲卫英雄的影响，英姿一直很喜欢风驰电掣。在一次追捕飞车党的过程中，面对狡猾的飞车党幸得英姿精湛的车技，与三元一起将飞车党绳之于法，二人更冰释前嫌，成为了工作上的好拍档。由于三元一直忙碌工作，忽略了丈夫与儿女，丈夫程峰开始时十分体谅，但久而久之，摩擦日深，三元与峰关系越来越恶劣，幸卫英姿从旁开解劝导，三元才醒觉一直只为工作而忽略家人，正当三元想补救之际，一次无心之失的意外，令二人以分居收场。但他们在工作中还是有很多合作的机会，而他们的女儿正好在一次械劫案中被歹徒挟持做人质了，面对年幼的女儿，二人合力拯救了女儿。而英姿被上司误以为飞车而被调到陈小生所带领的特遣队，小生与英姿都觉得对方是自己的克星，常常斗气。后来英姿在失意的时候得到了小生的多番安慰，渐渐培养出了感情，但此时父亲英雄却嫌弃小生比英姿大很多而反对这段恋情，两人的关系进退两难。

《陀枪师姐》为TVB经典系列作品，剧中人物“娥姐”朱素娥、陈小生、陈三元等亦成为观众耳熟能详的角色。《陀枪师姐2021》故事保留《陀枪》系列轻松搞笑风格，滕丽名亦继续留任，饰演元祖级陀枪师姐“陈三元”。

陈三元自小受叔叔陈小生的影响，大学毕业后毫不犹豫地投身警界成为陀枪女警，她性格坚韧、勇敢，一心扑在工作上，在执行任务时总是冲锋在前，努力在警队中证明自己的价值。朱素娥曾以为自己拥有一个人人羡慕的家庭，与丈夫的婚姻幸福美满，不料意外发现丈夫竟有婚外情，素娥伤心欲绝，离婚后为了能更好地生活下去，决定给自己一个新的开始，转当配枪女警，以求升职。两人被分在同一小队后，从最初的观念冲突到逐渐磨合，成为一对默契搭档。她们共同处理了多起棘手案件，素娥凭借细腻的观察力和生活经验屡破奇案，三元则用果敢的行动力弥补了经验的不足。同时，素娥与风趣幽默的“师奶杀手”陈小生从欢喜冤家渐生情愫，三元也在与同事程峰的合作中收获了爱情。

承接第一、二辑的“陀枪师姐”，第一代陀枪师姐陈三元在这一辑将会接受新的考验，与新扎师姐卫英姿同时进入警察交通部，当铁骑女警。其时元刚升职为见习督察，与姿同隶属交通部西九龙警区其中一小队。姿与父卫英雄相依为命，雄年轻时为飞车特技人，在行内甚有名声，姿受雄影响，自少便对车有浓厚兴趣，姿投考警员当交通警，亦因为能驾着车在公路上飞驰。姿第一天上班，便遇上高级督察陈小生，差点发生交通意外，二人均对对方俱...

卫英姿以她一贯的英勇拼搏，在执行任务当中获得不少嘉许，令英姿对自己的事业更加充满了信心，而她与特遣组高级督察陈小生也确立了情侣关系，感情稳定，这一剎那，卫英姿确是事业爱情两得意。然而，小生多年来一直渴望结婚、生儿育女，当然对和英姿的婚事甚为着紧，可是纵使小生多番明示暗示，英姿都以自己目前事业为重而多番推搪，英姿满怀雄心，希望争取机会升为督察，所以把结婚的问题搁置。至于陈三元，她再度身怀六甲，而...